Флуоресцентная микроскопия
Описание методики
Широкопольная флуоресцентная микроскопия живых клеток
Принцип метода
Широкопольная (widefield) флуоресцентная микроскопия основана на одновременном освещении всего поля зрения образца светом определённой длины волны, вызывающей флуоресценцию меченых молекул. Регистрируемое излучение флуорофоров отделяется от возбуждающего света с помощью дихроичных зеркал и полосовых фильтров, что позволяет получать высококонтрастные изображения специфически меченых структур на тёмном фоне.
Система Leica AF7000 дополняет классическую широкопольную флуоресцентную микроскопию рядом расширенных режимов:
- Интервальная (time-lapse) съёмка — покадровая запись динамических процессов с последующей сборкой анимации; поддержка одновременной съёмки нескольких позиций препарата.
- Z-стекинг и 3D-реконструкция — получение серии оптических срезов по оси Z с последующей трёхмерной реконструкцией объекта.
- Деконволюция — программное восстановление резкости изображений (2D и 3D) с использованием алгоритмов, интегрированных в Leica LAS-AF.
- Сшивка панорам (tile scan) — создание обзорных изображений больших областей препарата путём автоматической съёмки и объединения множества полей зрения.
- Микроскопия дифференциального интерференционного контраста (DIC) — визуализация неокрашенных прозрачных объектов в проходящем свете.
- FRET SE — измерение резонансного переноса энергии флуоресценции (Fluorescence Resonance Energy Transfer) для изучения молекулярных взаимодействий в живой клетке; доступно до 10 FRET-триплетов в секунду.
- TIRF (требует дополнительного модуля) — микроскопия полного внутреннего отражения для визуализации молекулярных событий вблизи плазматической мембраны.
- Ратио-визуализация (Ratio Imaging) — количественное измерение внутриклеточных ионов (Ca²⁺, pH и др.) с использованием рациометрических красителей (Fura-2, BCECF, JC-1 и др.).
Области применения
| Направление исследований | Примеры задач |
|---|---|
| Клеточная биология | Визуализация органелл, цитоскелета, ядра; отслеживание сигнальных каскадов |
| Физиология клетки | Мониторинг внутриклеточного Ca²⁺, pH, мембранного потенциала митохондрий |
| Молекулярная биология | Изучение белок-белковых взаимодействий методом FRET; локализация GFP-меченых конструкций |
| Клеточная динамика | Time-lapse наблюдение за клеточным делением, миграцией, апоптозом |
| Работа с живыми объектами | Долговременные эксперименты с культурами клеток в физиологических условиях (37 °С, 5% CO₂) |
| Нейробиология | Измерение динамики нейромедиаторов и ионных токов в нейронах |
| Микробиология | Визуализация бактерий, дрожжей, простейших |
Поддерживаемые типы образцов
Стандартные предметные стёкла · покровные стёкла · чашки Петри · 96/384-луночные микропланшеты · климатические камеры для живых клеток.
Приборы, на которых выполняется методика
-
Leica AF7000Забронировать →
Широкопольная флуоресцентная микроскопия живых клеток: многоканальная съёмка, time-lapse, 3D-реконструкция, деконволюция, FRET. Инкубатор с термостатированием и подачей CO₂. Объективы 5×–100×.